工器具的洁净度
1.玻璃器皿：采用干热灭菌方式进行灭菌。
2.做样用剪刀、勺子等物品要做到做样专用，不可与其它操作器具混用，使用时，先用75%酒精消毒，再采用灼烧方式进行灭菌。
3.接种针(环)采用灼烧方式进行灭菌，但要注意做样时要先将接种针(环)进行冷却。
样品的采集及检测
一、保证采样器具的无菌性
1.玻璃器皿：采用干热灭菌方式进行灭菌，保证恒温、时间足够(但不可时间过长，导致玻璃器皿易裂纹而报废)。
2.取样筐：使用前要用 75%酒精进行喷洒消毒。
3.取样勺、浓奶取样提子：要保证其清洁消毒，清洁后用 75%酒精进行擦拭消毒。
4.取样袋：可现用酒精进行擦拭消毒，再在超净台用紫外灯照射消毒，(包装车间要在传递窗用紫外灯照射消毒)。
5.电子称表面用 75%酒精消毒。
二、人员操作
1.保证手部的清洗、消毒：取样前及做样前都要先洗手再消毒。
2.取样要具有代表性(随机样、目的样、综合样)且要标示清楚。
3.取样完毕，不可在车间逗留，要及时将样品放入超净台，对其外表面进行紫外灯照射消毒。
4.在要求的做样区域进行操作。
5.做样前，要用 75%酒精棉球对样品袋口部进行擦拭消毒，再开口。
6.往盐水瓶加样品时，要注意勺子或袋子尽量不接触瓶口。
7.样品计量要准确，稀释倍数也要准确(1mL 吸管不允许将管口敲掉)，进行 100 倍稀释时，1mL吸管要伸入盐水中，不可以将样品管壁流下去，同时要避免将管底部捅破。
8.盐水温度以 40℃左右为宜，不能过热，将部分微生物烫死，也不能温度太低，不能将奶粉溶解完全。
9.进行稀释时，要摇匀，保证溶液的均一性。
10.倾倒平皿时，要注意培养基瓶口不要接触到平皿;倾倒的培养基要适量，不可以太少，在培养过程中干掉，微生物亦死亡，以 15mL左右为宜。
11.做大肠菌群样时，要提前将乳糖胆盐培养基培养管按需要量备好，放入超净台对外表面进行紫外线灭菌。
12.接二步时，要注意先将接种针(环)进行冷却，避免出现接不上菌落的情况发生，导致无法判断、确认。
13.做样完毕，及时放入相应培养箱进行培养，并清理清洁超净台。
微生物的培养
1.在培养过程中，要随时监控培养箱温度，保证其在适宜的温度进行培养。
2.要按照《微生物检验规范》要求及时观察结果，出现异常，要及时分析原因进行反馈。
